細胞室二氧化碳培養箱的消毒使用和維護

凡混入CO2培養(yang) 箱（細胞培養(yang) 環境）中，對細胞生存有害的成分和造成細胞不純的異物都應視為(wei) 汙染。細胞持續在汙染環境中生長時，輕者細胞生長緩慢，細胞分化變形，較重的細胞增殖停止，從(cong) 瓶壁脫落，甚至死亡。不同的汙染物對細胞的影響也有差別，有的影響是長期、緩慢和潛在的，而有的則能在很短的時間內(nei) 抑製細胞生長或產(chan) 生有毒物質細胞。根據汙染源不同主要可以分為(wei) ：生物性汙染、化學性汙染、物理性汙染和氣溶膠汙染。

1.1生物性汙染

這是最常見也是危害最大的汙染。如細菌、病毒、真菌，支原體(ti) 等。這些汙染源有可能是人為(wei) 帶入，或是細胞在放入培養(yang) 箱前已經受汙染，再或者是箱體(ti) 本身沒有消毒幹淨。體(ti) 外培養(yang) 的細胞自身沒有抵抗汙染的能力，而培養(yang) 基中所加抗生素的抗微生物汙染的能力也是有限的，因而細胞微生物汙染一旦發生往往是無法挽救的。

1.2化學性汙染

培養(yang) 箱中許多化學物質都可以引起細胞汙染。如細胞培養(yang) 容器清洗過程中殘留的洗滌劑、加濕器中未純化的水、人為(wei) 帶入的液體(ti) 或氣體(ti) 都可能成為(wei) 化學性汙染的來源。不同化學物質對細胞汙染是不一樣的，有的可能促進或抑製細胞生長，有的甚至殺死細胞。

1.3物理性汙染

培養(yang) 環境中的物理因素，如溫度、放射線、振動、輻射（紫外線或熒光）會(hui) 對細胞產(chan) 生影響。物理性汙染常常被人們(men) 所忽視或被籠統地歸為(wei) 化學性汙染，其主要是在代謝水平或分子水平上，影響細胞正常的生理過程。

1.4氣溶膠汙染

氣溶膠是液體(ti) 或固體(ti) 微粒均勻地懸浮在氣體(ti) 介質中的分散體(ti) 係，當微粒是微生物時，就是微生物氣溶膠，如果這種微生物是病原性的，就是病原微生物氣溶膠。細菌、病毒等病原體(ti) 通過氣溶膠可在人與(yu) 人、人與(yu) 環境之間傳(chuan) 播。微生物氣溶膠可分為(wei) 兩(liang) 大類：一類是飛沫核氣溶膠，另一類是粉塵氣溶膠。醫學實驗室內(nei) 許多操作都可以產(chan) 生氣溶膠，並且大多可能是病原微生物形成的感染性氣溶膠，由於(yu) 其氣溶膠分子小，漂浮在空氣中、粘附於(yu) 人身上，易在空氣中擴散而汙染實驗室的空氣。

2.1CO2培養(yang) 箱的選擇

二氧化碳培養(yang) 箱的製造商們(men) 設計了多種不同的裝置去減少和防止汙染的發生，其主要是防汙染設計和消毒滅菌係統的改進，以達到消毒滅菌的目的。如帶有紫外消毒功能的CO2培養(yang) 箱、帶HEPA過濾器的CO2培養(yang) 箱，以及帶高溫消毒的CO2培養(yang) 箱等，後者又分為(wei) 高溫幹熱和高溫濕熱兩(liang) 類。這些裝置的滅菌能力各有千秋，紫外燈消毒範圍有限，距離燈越遠，消毒能力越差。HEPA 過濾器的過濾膜孔徑有限，無法去除病毒和一些微小細菌，並且容易損耗，也有其局限性。相比而言，高溫消毒則是比較有效的方法。而高溫幹熱和高溫濕熱也有所不同，由於(yu) 蒸汽潛熱大、穿透力強，容易使蛋白質變性或凝固，因此高溫濕熱的滅菌效率比幹熱滅菌法高。

2.2提高素質

人為(wei) 因素和態度可以對環境、人和物起到一個(ge) 正麵或負麵的影響。以安全為(wei) 目的，實驗室內(nei) 的工作人員應明白自身的態度和人為(wei) 因素對實驗環境的重要性。因此，對實齡室工作人員進行專(zhuan) 業(ye) 培訓，特別是進實驗室前的培訓。並且定期進行考核檢查是十分必要的。

2.3重視管理

細胞室內(nei) 的培養(yang) 箱應由專(zhuan) 人負責管理，定期對係統進行校正，至少每年一次。各項數值一旦固定後，不要隨意調節，以免影響箱內(nei) 溫度、濕度、CO2濃度的波動，降低機器的靈敏度，同時還會(hui) 影響培養(yang) 箱內(nei) 的細胞生產(chan) 狀態。使用前，對培養(yang) 箱的各項指標進行係統校正，並且對箱體(ti) 和內(nei) 部進行消毒處理，等各項數值穩定一段時間後方可使用。一旦出現緊急問題，應及時上報，應由專(zhuan) 業(ye) 的人員進行操作，馬上采取應對措施，以免造成不必要的損失。

2.4規範操作

培養(yang) 箱的使用雖然很簡單，但同樣需要規範操作。進細胞室必須穿著實驗服（白大褂），換上拖鞋或者穿一次性的鞋套。實驗操作時必須帶一次性手套， 特別是打開培養(yang) 箱前，必須先用75%的酒精噴壺噴洗雙手再開培養(yang) 箱，再取出細胞培養(yang) 瓶或培養(yang) 板。顯微鏡下查看細胞培養(yang) 瓶或培養(yang) 板後，再放回培養(yang) 箱時，同樣也要噴酒精消毒。培養(yang) 箱的兩(liang) 個(ge) 門開關(guan) 取（放）物要迅速，不可長時間開著，否則會(hui) 影響CO2的濃度、溫度和濕度，以及造成汙染。尤其是不要忘了關(guan) 好裏層的玻璃門。切記開時不要對著培養(yang) 箱說活，大口呼吸甚至是打噴嚏。

2.5加強防護

如果實驗人員生病而攜帶病菌，應帶上口罩再進細胞室，病情嚴(yan) 重的則不宜進行實驗。女性同誌實驗時頭發應梳起，防止皮屑汙染及連帶事件的發生。如果實驗室條件允許，可以每人佩戴實驗帽、手套和口罩，以防汙染培養(yang) 箱及對實驗人員的自身的防護。

2.6注重保養(yang)

二氧化碳培養(yang) 箱置於(yu) 細胞室中，室內(nei) 需保持幹燥，環境溫度不能超過30℃ （建議: 18℃ -30℃）。培養(yang) 箱放置在遠離門窗、供暖設備和空調導管的地方，不能被陽光直接照射。培養(yang) 箱的放置台麵必須水平避震且非易燃材質，不能靠在牆壁或類似的建築物上，其後部接電處和牆壁至少保留30cm的空間。一旦放好不宜再移動。

2.7校正處理

二氧化碳培養(yang) 箱在放好後，再對箱體(ti) 和內(nei) 部進行消毒處理，並且對各項指標進行係統校正，等各項數值穩定一段時間後方可使用。因CO2氣體(ti) 對於(yu) 健康是有害的，因此細胞室需安裝足夠的通風裝置。空氣中的粉塵氣溶膠易造成培養(yang) 箱的汙染，需要一個(ge) 流通的空氣環境。將培養(yang) 箱的管理任務分派給有經驗的檢查人員是十分重要的。如長期不使用二氧化碳時，應將CO2開關(guan) 關(guan) 閉，防止CO2調節器失靈。

3.1清潔

清潔是指去除灰塵、汙垢和有機汙漬。清潔方法包括刷、吸、幹擦、洗滌或用浸泡肥皂水或清潔劑的濕布拖擦。粉塵、汙物以及有機物是微生物的棲身之所，並可能影響除汙染劑（抗菌劑、化學殺菌劑以及消毒劑）的作用。必須先經過清潔才能實現消毒和滅菌的目的，許多殺菌劑隻對經過清潔過的物品才具有殺菌活性。清潔時必須使用與(yu) 以後使用的消毒劑或殺菌劑化學性質上相容的試劑進行清潔、消毒。

3.1.1清潔箱體(ti) 表麵

先拂去表麵的灰塵，再用濕的海綿或軟布清洗，再用軟布擦幹。如果有汙物則用低濃度的清潔劑清洗，然後擦幹。

3.1.2清洗箱體(ti) 內(nei) 部

選擇合適的消毒劑。所有的物件和表麵必須清洗，然後用無菌水衝(chong) 洗，再擦幹或晾幹。

3.1.3清洗玻璃門

清洗箱內(nei) 的玻璃門時使用的清潔劑和清洗培養(yang) 箱內(nei) 部時使用的相同。然後用蒸餾水漂洗，從(cong) 而清除殘留的清潔劑，最後用軟布把門擦幹。

3.2消毒和滅菌

消毒是指殺死微生物的物理或化學手段，但不一定殺死其孢子。滅菌是指殺死所有微生物，當培養(yang) 箱內(nei) 細胞受到汙染時則需要采取滅菌措施。一般， 在培養(yang) 箱內(nei) 細胞沒有汙染的情況下平均1-3個(ge) 月消毒一次。常用的3種消毒滅菌的方式是：液體(ti) 消毒劑、紫外和加熱。

3.2.1液體(ti) 消毒劑

選擇對培養(yang) 箱無腐蝕性的液體(ti) 消毒劑，並且液體(ti) 消毒劑的消毒效果好壞和很多因素有關(guan) 。比如：場所的溫度、接觸時間、pH、穿透能力、有機物的反應。這些因素中的一些很小的變化可能會(hui) 造成去汙劑的效力上大的不同。因此甚至在很有利的情況下，當最終要求必須無菌時，液體(ti) 去汙劑也不是可信賴的去汙方法。

3.2.2紫外消毒

一般先用蒸餾水清洗幹淨後，再用紫外燈照射（帶紫外燈的培養(yang) 箱）一天或者用手提式的紫外燈照射。

3.2.3加熱

濕熱和幹熱被認為(wei) 是殺菌有效的方法。在一般環境下，高壓滅菌器加熱到121℃快速產(chan) 生蒸汽方便的方法。幹熱160℃-170℃，2-4小時在不具有滲透性、非有機體(ti) 的物質（如玻璃）是可行的淨化方法，但是甚至在有機體(ti) 或非有機體(ti) 的淺層也不能被絕緣。

除了以上幾種方法外，還可以采用聯合殺菌的方法，幾種消毒滅菌的方法同時使用來達到清潔的效果。

3.3.細胞室內(nei) 空氣的消毒

3.3.1聯合消毒法

可以聯合使用液體(ti) 和氣體(ti) 消毒劑來清除實驗室空間、用具和設備的汙染。清除表麵汙染時可以使用次氯酸鈉溶液：濃度0.1%溶液用於(yu) 普通的環境衛生設備，而當處理高危環境時，建議使用高濃度（0.5%）的溶液。在清除環境汙染時，含有3%過氧化氫的溶液也可以作為(wei) 漂白劑的代用品。

3.3.2熏蒸法

通過加熱多聚甲醛或煮沸福爾馬林所產(chan) 生的甲醛蒸汽熏蒸來清除房間和儀(yi) 器的汙染。這是一項需要由專(zhuan) 門培訓的專(zhuan) 業(ye) 人員來進行的、非常危險的操作。產(chan) 生甲醛蒸汽前，房間的所有開口（如門窗等）都應用密封帶或類似物加以密封。熏蒸應當在室溫不低於(yu) 21℃且相對濕度高於(yu) 70%的條件下進行。熏蒸法消毒時，氣體(ti) 需要與(yu) 物體(ti) 表麵接觸至少8小時，而熏蒸後，該區域必領通風後才能允許人員進入。

3.4消毒注意事項

3.4.1不要使用強堿和強腐蝕性的試劑以及含高含量次氯酸鈉的漂白劑和消毒劑，雖然不鏽鋼有耐腐蝕性，但不是不受腐蝕。

3.4.2避免在CO2傳(chuan) 感器上噴酒清洗劑，清洗之前要使傳(chuan) 感器充分冷卻。一般清洗用的水是蒸餾水或去離子水，不能用自來水。

3.4.3揮發性的甲醛有毒，易燃、易爆。如果在培養(yang) 箱內(nei) 殘留甲醛的話，會(hui) 影響細胞正常生長，甚至使細胞死亡。

細胞室二氧化碳培養(yang) 箱的消毒使用和維護，通訊作者：鄧伊王誌強

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